染色体检测

染色体核型分析是对整个基因组进行分析，包括染色体数目异常和结构异常，在血液肿瘤的诊断、疾病危险度评估、预后分层、治疗方案选择和治疗效果监测、靶向治疗以及是否需要进行骨髓移植的选择等方面有重要临床意义。

● 骨髓/外周血/脑脊液/胸腹水/淋巴组织(G显带)染色体核型分析[CA] 

CLL首选标本为外周血，需用两种不同的方法进行培养和分析，收取两份费用

● 先天性染色体异常核型分析[CB]

标本必须用外周血；诊断体质性染色体改变，或遗传性/先天性疾病的染色体异常。

● 染色体断裂试验[CC]

标本必须用外周血；用于范可尼贫血（先天性再障）的诊断和鉴别诊断。

荧光原位杂交(FISH)项目

FISH是从细胞水平检测基因的异常，包括基因的丢失、扩增/增加、易位等，或细微的染色体结构异常，染色体数目异常，以及识别mar染色体（染色体水平无法识别其结构异常的染色体）。可检测间期细胞，不受中期分裂象限制，也可检测中期分裂象，尤其在检测与预后密切相关且有众多伙伴基因的基因方面具有明显优势。

● 双色探针[C1]

● 单色探针

● 骨髓涂片/病理石蜡包埋切片FISH[C1A]

每一张涂片多做两种不同的FISH探针检测，按探针数收费。

● 间期细胞性别染色体FISH(X/Y)[C2A]

常用于供受者性别不同的移植时，移植后供受者细胞比例的动态监测。

● 染色体全长探针（涂抹探针）FISH[C2C]

用于识别mar染色体或隐匿性易位

FISH多探针组合

● AML 4探针组合[C4A]

RUNX1-RUNX1T1；CBFB分离探针；PML-RARA；MLL分离探针

● AML 8探针组合[C4B]

RUNX1-RUNX1T1；CBFB分离探针；MLL分离探针；PML-RARA；GATA2,MECOM；TP53；DEK-NUP214；MLLT3-MLL

● MDS 5探针组合[C5A]

EGR1/D5S23；D7S486/CEP7；CEP8；D20S108；TP53

● MDS 8探针组合[C5B]

EGR1/D5S23；D7S486/CEP7；CEP8；D20S108；MLL；CEPY；GATA2,MECOM；TP53

● B-ALL 4探针组合[C6A]

BCR-ABL1；E2A分离探针；iAMP21；MLL分离探针

● B-ALL 10探针组合[C6B]

BCR-ABL1；CHIC2/D10Z1/D17Z1；E2A分离探针；ETV6-AML1；iAMP21；

IGH分离探针；MLL分离探针；MYC分离探针；NUP214-ABL1；P16/D9Z3

● B-ALL高危及靶向治疗相关11探针组合[C6C]

BCR-ABL1；CRLF2；P2RY8；PDGFRB；E2A分离探针；ETV6-AML1；

iAMP21；MLL分离探针；NUP214-ABL1；JAK2分离探针；TP53

● BCR-ABL1样5探针组合ALL[C7]

BCR-ABL1；IGH@-CRLF2；P2RY8-CRLF2；PDGFRB分离探针；JAK2分离探针

● T-ALL 4探针组合[C8]

NUP214-ABL1；TRA-D/C分离探针；TCF3分离探针；PDGFRB分离探针

● CLL 4探针组合[C9A]

ATM/CEP11；CEP12；D13S319；TP53

● CLL 8 探针组合 [C9B]

ATM/CEP11；CCND1-IGH；CEP12；D13S319；IGH-BCL2；IGH分离探针；MYB；TP53

● 多发性骨髓瘤(MM)5探针组合[C10]

CCND1-IGH；FGFR3-IGH；IGH-MAF；TP53；1q21扩增

● 淋巴瘤4探针组合[C11A]

IGH-BCL2；CCND1-IGH；IGH 分离探针；MYC 分离探针。组织印片/ 新鲜标本，不包括病理切片。

● DLBCL 4探针组合[C11B]

IGH-BCL2；BCL6分离探针；CCND1-IGH；MYC/CEP8-IGH三色探针。组织印片/新鲜标本，不包括病理切片。

● MCL4探针组合[C11C]

CCND1-IGH；CEP12；D13S319；TP53。组织印片/ 新鲜标本，不包括病理切片

● 神经母细胞瘤2探针组合[C12]

MYCN；1p36微缺失

● 嗜酸相关基因3探针组合[C13]

FGFR1；PDGFRA；PDGFRB；

[可另行加做JAK2分离探针（2016版WHO:PCM1-JAK2融合基因也与嗜酸异常相关）]

● 自选4探针

FISH检测相关基因临床意义简介

● RUNX1-RUNX1T1，t(8;21)(q22;q22)

见于约8%成人和12%儿童AML，不伴KIT突变者预后好，伴KIT、FLT3突变者用TKIs有效。

● CBFB分离探针，inv(16)(p13q22)

inv(16)(p13q22)形成CBFB-MYH11融合基因，通常见于伴嗜酸性粒细胞增高的AML，不伴KIT突变者预后好。

●PML-RARA，t(15;17)(q24;q21)

见于98%的AML-M3，是APL的主要诊断指标。

●DEK-NUP214，t(6;9)(p23;q34)

见于约1-2%的AML，通常预后较差。

●MLLT3-MLL，t(9;11)(p22;q23)

见于AML，尤其是在M5中多见，在所有累及MLL的异常中，预后相对较好，在AML中预后中等。

● MLL(KMT2A) 分离探针，t(v;11q23)/del(11q)

MLL基因易位见于各类型白血病，包括AML、ALL、MAL、t-AML等，总发生率约10%，在婴儿B-ALL中发生率达85%，AML中常见于M4和M5，初发AML占3%、治疗相关AML占10%，预后差。

目前已报道的MLL伙伴基因有近百种，PCR方法难以检测少见的融合类型，而MLL分离探针可检测各种MLL易位。

●D7S486/CEP7，-7/del(7q31)

-7/del(7q)发生于约15%的成人MDS，40%的儿童MDS，50%的治疗相关

AML/MDS，在MDS中del(7q)预后中等；-7预后差。AML中-7预后差。

● EGR1/D5S23，-5/del(5q31)

常见于MDS、AML，在MDS中发生率占10-15%。MDS中del(5q)预后好，而在AML中-5/del(5q)预后差。

●CEP8，+8

常见于AML、MDS和CML急变时，AML/MDS中单独+8时预后中等，CML患者病程中在t(9;22)易位的基础上出现+8，往往提示疾病进入加速期或急变期，是疾病进展的高危因素。

●D20S108，20q12/del(20q12)

常见于MDS、MPN、AML等，在MDS患者中预后好，MPD中预后不受影响。

●GATA2,MECOM，inv(3)(q21.3q26.2)/t(3;3)(q21.3;q26.2)

主要见于AML、MDS，发生率约2-5%，预后极差。

●BCR-ABL1，t(9;22)(q34;q11)

见于CML、ALL、AML等，BCR-ABL1易位是CML的特征性异常，伴BCR-ABL1的急性白血病多预后差。伴BCR-ABL1易位者对TKIs治疗有效。

●ETV6(TEL)-AML1，t(12;21)(p13;q22)

主要见于儿童B-ALL，发生率约25%，预后好。细胞遗传学水平不易检出此异常，需用FISH或PCR方法检测。

●E2A分离探针，t(1;19)(q23;p13.3)/ t(17;19)(q22;p13.3)

主要见于B-ALL，t(1;19)是E2A常见的重排，出现在5%的B-ALL和20%的前B-ALL中，易侵犯中枢神经系统，早期强化疗能显著改善疗效；t(17;19)在所有ALL中占1%，预后差。

● iAMP21扩增

见于2%的B-ALL，是复发的高风险指标，常规治疗效果差，早期发现，大剂量高强度化疗能显著改善疗效。FISH是有效的检测方法。

● CHIC2/D10Z1/D17Z1，+4/+10/+17

检测B-ALL超二倍体染色体，在高超二倍体B-ALL中，当+4/+10/+17同时出现时，预后特别好。

● IGH分离探针，t(v;14q32)

见于B细胞肿瘤，包括B-ALL和B细胞淋巴瘤。IGH有多个易位伙伴基因，

IGH分离探针可检测各种IGH易位。

●P16(CDKN2A)-D9Z3，9p21/del(9p21)

约10%儿童ALL可检出del(9p21)，尤其在T-ALL中发生率高，伴del(9p21)者中约90%可检测到P16基因丢失。

● MYC分离探针，t(v;8q24)

可检测各种MYC基因的易位。BL中85%为t(8;14)(q24;q32)，10%为t(2;8)

(p11;q24)，5%为t(8;22)(q24;q11)；t(8;14)(q24;q32)还可见于DLBCL(5%-22%)、FL、DHL/THL；MYC异常在DLBCL、DHL/THL、FL中预后差。约2%的T-ALL中可见t(8;14)(q24;q11.2),对治疗反应差。

● MYC/CEP8-IGH三色探针

检测t(8;14)(q24;q32)染色体易位及8号染色体数目异常。

● NUP214-ABL1

主要见于约6%的T-ALL，TKIs治疗有效。

●TRA/D 14q11.2

约30%的儿童T-ALL中常常累及T细胞受体基因TCRA\TCRB\TCRG\TCRD的易位，TRA/D探针可检测包括t(10;14)(q24;q11.2)、t(1;14)(p32;q11.2)t(11;14)

(p15;q11.2)、t(11;14)(p13;q11.2)等涉及14q11位点的各种TCRA/D易位。

● TLX3分离探针5q35

由于t(5;14)(q35;q32)易位而致TLX3表达失调，见于20%的儿童T-ALL和13%的成人T-ALL，t(5;14)(q35;q32)易位通常是隐匿性的，细胞遗传学方法难以识别，用FISH方法可有效检测。预后差。

● ATM/CEP11，CEP11/del(11q22)

ATM位于11q22，缺失常在CLL中出现，ATM缺失提示预后差，同时伴TP53突变时，预后更差。

● CEP12，12号着丝粒/12三体

12号染色体三体在CLL中多见，预后中等或差；在MCL中预后差。

●D13S319，13q14/del(13q14)

13q14缺失见于很多恶性血液肿瘤，包括CLL、MM、MCL、DLBCL等，在CLL中发生率约55%，预后好，在MM中发生率约16-40%，预后中等或差。

●CCND1-IGH，t(11;14)(q13;q32)

是MCL的标志性异常；MM中也常见，在MM中预后较好或中等。

●IGH-BCL2，t(14;18)(q32;q21)

见于FL、DLBCL等淋巴系统肿瘤；若同时有IGH-BCL2和MYC基因易位的Double-Hit或Triple-Hit淋巴瘤预后差。

●D6Z1-MYB，6q23/del(6q23)

CLL中约5%患者可见，预后不良。

● BCL6分离探针3q27

涉及BCL6基因(3q27)的易位，见于30%-35%的DLBCL和10-15%的FL淋巴瘤，在DLBCL中预后差。

● CEPX/CEPY，X/Y着丝粒

异性别造血干细胞移植后嵌合状态检测，实时，准确性高。

●TP53，del(17)(p13)

TP53是重要的抑癌基因，几乎见于各种髓、淋系肿瘤，其丢失或突变在各种血液肿瘤中都是预后差的标志。

● MM常见相关基因的FISH检测

◇CCND1-IGH，t(11;14)(q13;q32)

是MCL的标志性异常；MM中也常见，在MM中预后较好或中等。

◇ FGFR3-IGH，t(4;14)(p16;q32)

是MM特征性异常，预后差。至少85%的t(4;14)患者同时存在del(13q)。

◇ IGH-MAF，t(14;16)(q32;q23)

见于约5%的MM患者，易位后可导致MAF基因过表达，预后差。

◇1q21扩增/1p32丢失

是MM中常见异常之一，发生率约30-35%，与疾病的进展密切相关，伴此异常患者生存期短，预后差。硼替佐米等新药治疗不能克服其不良预后。

◇TP53，del(17)(p13)

在MM患者中约占10%。它的缺失导致患者对化疗药物不敏感，预后极差。

● 与嗜酸粒细胞增高相关基因的FISH检测

◇ FGFR1 8p11

与FGFR1相关疾病中，常表现为淋巴瘤，特别是T-LBL伴嗜酸粒细胞增多，

CEL或AML。已鉴定出于FGFR1形成融合蛋白的伙伴基因有14种。

◇ PDGFRA 4q12

与PDGFRA相关疾病中，常表现为CEL伴有显著肥大细胞系累及，或AML伴嗜酸粒细胞增多。常由于4q12隐匿性缺失形成FIPIL1-PDGFRA融合基因。

◇ PDGFRB分离探针

可检测各种PDGFRB基因易位。PDGFRB融合基因见于MPN、MDS、AML、B-ALL、T-ALL等各种类型白血病，也是BCR-ABL1样ALL中较常见的异常，通常TKIs治疗有效。目前已报道的PDGFRB伙伴基因超过20种，常见的是ETV6(TEL)-PDGFRB。约8%Ph-like ALL存在EBF1-PDGFRB

融合基因。

◇PCM1-JAK2t(8;9)(p22;p24.1)

2016版WHO提出将髓系/淋系肿瘤伴t(8;9)(p22;p24.1)/PCM1-JAK2作为一个暂定的新的分类亚型。PCM1-JAK2融合基因阳性患者常呈现慢性髓系肿瘤特点，例如MPN或MDS/MPN，50%-70%有嗜酸性粒细胞增高和/或骨髓纤维化；较少伴发T-LBL或B-ALL；骨髓形态红系增生明显伴淋巴细胞聚集。JAK抑制剂治疗效果欠佳，预后差，早期需考虑异基因造血干细胞移植。可用JAK2断裂分离探针推测PCM1-JAK2融合基因的存在。

● BCR-ABL1样B-ALL相关基因的FISH检测

◇ ABL1基因

目前已报道ABL1除BCR外还有至少7个其它伙伴基因，次常见的为TEL-ABL1，而且大多用伊马替尼等激酶抑制剂(TKIs)治疗有效。用BCR-ABL1融合基因探针间接检测任何涉及ABL1的易位。

◇ CRLF2分离探针

约50%BCR-ABL1样B-ALL中存在CRLF2易位，常见CRLF2-IGH，CRLF2易位或突变的ALL多伴有JAK1/2或ABL1家族的激酶活化突变，JAK抑制剂治疗有效。

◇ P2RY8丢失探针

P2RY8与CRLF2基因均位于Xp22或Yp11上，相距大约300kb，其间的拟常染色质区微缺失致P2RY8基因增强子与CRLF2基因启动子并置，导致CRLF2基因过表达。JAK抑制剂治疗有效。

◇ PDGFRB分离探针

可检测各种PDGFRB基因易位。PDGFRB融合基因见于MPN、MDS、AML、B-ALL、T-ALL等各种类型白血病，也是BCR-ABL1样ALL中较常见的异常，通常TKIs治疗有效。目前已报道的PDGFRB伙伴基因超过20种，常见的是ETV6(TEL)-PDGFRB。约8%Ph-likeALL存在EBF1-PDGFRB融合基因。

◇ JAK2分离探针

JAK2基因位于9q24，是细胞因子信号通路上的一种酪氨酸激酶，在MPN、BCR-ABL1样ALL中都可见JAK2的突变和易位，常见的易位伙伴基因有：PCM1、BCR、ETV6、SSBP2和3q21；在BCR-ABL1样ALL中已报导的易位伙伴基因有ATF7IP、BCR、EBF1、ETV6、PAX5、PPFIBP1、SSBP2、STRN3、TERF2、TPR，采用JAK2分离探针，均可有效检测JAK2基因是否受累，无需考虑其伙伴基因。是JAK2抑制剂治疗靶点。

● 神经母细胞瘤相关基因的FISH检测

◇ MYCN，MYCN扩增

神经母细胞瘤特有的遗传学改变，预后差。

◇ 1p36微缺失

1p36微缺失导致肿瘤抑制基因失活，多见于神经母细胞瘤，预后不良。